胱抑素CElisa試劑盒使用時(shí)注意事項(xiàng)都有哪些？
點(diǎn)擊次數(shù)：968 更新時(shí)間：2022-08-23
胱抑素C是一種低分子量、堿性非糖化蛋白質(zhì)，是一種半胱氨*蛋白酶抑制劑。編碼基因?qū)儆诠芗一颍茉谒械挠泻思?xì)胞內(nèi)以恒定速度持續(xù)轉(zhuǎn)錄與表達(dá)，無組織特異性。其分子量小（13KD），生理?xiàng)l件下帶正電荷，能自由從腎小球?yàn)V過，*被腎小管上皮細(xì)胞重吸收并于細(xì)胞內(nèi)降解，不重新回到血液中；同時(shí)腎小管上皮細(xì)胞也不分泌胱抑素C至管腔內(nèi)。
胱抑素CElisa試劑盒檢測(cè)原理：
采用雙抗體夾心ELISA法。用抗體包被于酶標(biāo)板上，實(shí)驗(yàn)時(shí)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品中的抗原會(huì)與包被抗體結(jié)合，游離的成分被洗去。依次加入生物*化的抗體和辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素?？贵w與結(jié)合在包被抗體上的抗原結(jié)合、生物*與親和素特異性結(jié)合而形成免疫復(fù)合物，游離的成分被洗去。加入顯色底物，胱抑素CElisa試劑盒在辣根過氧化物酶的催化下呈現(xiàn)藍(lán)色，加終止液后變成黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長處測(cè)OD值，抗原濃度與OD450值之間呈正比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品中指標(biāo)的濃度。
胱抑素CElisa試劑盒使用注意事項(xiàng)：
標(biāo)本宜在新鮮時(shí)檢測(cè)，如有細(xì)菌污染，菌體中可能含有內(nèi)源性HRP,也會(huì)產(chǎn)生假陽性反應(yīng)。保存過久可發(fā)生聚合在ELISA中可使本底加深。
凍結(jié)標(biāo)本溶解后，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，應(yīng)充分混勻宜輕緩，避免氣泡，可上下顛倒混合，不要在混勻器上強(qiáng)烈震蕩。
渾濁或有沉淀的標(biāo)本應(yīng)先離心或過濾，澄清后再檢測(cè)。
反復(fù)凍融會(huì)使蛋白效價(jià)降低，所以代測(cè)樣本如需保存作多次檢測(cè)，宜少量分裝冰存。
ELISA實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線平直，一般有以下原因：標(biāo)準(zhǔn)曲線制備是否不當(dāng)，洗孔不凈，吸孔不充分，讀數(shù)不準(zhǔn)確或是吸量誤差。查找原因，即可找到相應(yīng)解決方案。
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