淺談減少E2定量elisa 試劑盒實驗誤差的小竅門
點擊次數(shù)：698次 更新時間：2020-07-17
E2定量elisa 試劑盒是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對底物的催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗技術(shù)。下文來講講elisa試劑盒在使用時的安全事項。
使用E2定量elisa 試劑盒的安全事項：
1、避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。
2、應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。
3、實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
4、不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
5、使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
6、使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
7、洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
8、底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
9、加入elisa試劑盒的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
10、按照說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
在日常的E2定量elisa 試劑盒實驗操作中，難免會遇到一些誤差，這些誤差有偶然誤差、過失誤差、系統(tǒng)誤差，而一個小小的誤差主意能夠影響到實驗，那么怎樣才能縮小實驗誤差呢？下面主要就簡單介紹一下吧。
1、檢驗技師應(yīng)具備從事實驗室操作的基本素質(zhì)和實踐經(jīng)驗。能熟練操作實驗儀器、器械，具有一定總結(jié)和分析問題的能力，對實驗中出現(xiàn)的意外情況能及時妥善解決。
2、使用校對過的微量移液器，排除自然誤差。移液器準(zhǔn)確與否對定量檢測尤為重要。
3、評估試劑的實用性，試劑的穩(wěn)定與否，對準(zhǔn)確率的高低到頭重要。在試劑啟用前，應(yīng)進(jìn)行陰、陽對照及樣品反復(fù)比照試驗，判定試劑符合要求后方可使用。
4、仔細(xì)閱讀說明書，嚴(yán)格按照說明書要求進(jìn)行規(guī)范化操作。不同批號的試劑不可混用。值得改進(jìn)的地方，反復(fù)試驗確定成立后才能改進(jìn)。
5、洗滌*，如若洗板不*，酶結(jié)合物本底顯色會呈現(xiàn)假陽性。洗滌液要新鮮，現(xiàn)用現(xiàn)配，陳舊的洗滌液會出現(xiàn)本底增高現(xiàn)象，也可能出現(xiàn)假陽性。
6、嚴(yán)控反應(yīng)時間，反應(yīng)時間過長，酶失活；反應(yīng)時間過短，酶結(jié)合物不能與血清中的微生物抗原抗體充分結(jié)合，生成物結(jié)構(gòu)松散不牢固，容易洗掉，都可能造成假陰性。
7、注意試劑盒保存期，過保存期的試劑不能使用。
8、加樣要準(zhǔn)確、快速。如果加樣不準(zhǔn)確，酶生成物的量不能確定，直接影響顯色結(jié)果。顯色的深淺及A值的測定與加入顯色劑和終止液的量有關(guān)，所以加樣應(yīng)慎重。要求在一定時間內(nèi)加樣完畢的實驗，如果加樣遲緩，便出現(xiàn)誤差，而且試劑長時間暴露在外，E2定量elisa 試劑盒尤其室溫過高時，保存期會縮短甚至失效。
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